¿Cuáles son las diferencias entre cromatografía de columna y HPLC? ¿Cuándo puede usarse un método y no el otro?

Answer 1

Gracias por el a2a: a mí me está pidiendo que compare una camioneta con un automóvil cuando pida comparar la cromatografía en columna con la HPLC (Cromatografía líquida de alta presión, aunque comercialmente se llama Cromatografía líquida de alta resolución).

Sin embargo, sí sirven propósitos ligeramente diferentes. Antes de realizar la HPLC solo teníamos cromatografía en columna. La ventaja de CC sobre HPLC es su costo relativamente bajo y su capacidad para procesar grandes cantidades de masa / volumen (en comparación con HPLC). Su desventaja es que es lento (en comparación con HPLC): generalmente utiliza la gravedad para arrastrar las sustancias a través de la columna (por lo general, está orientado verticalmente).

HPLC: la presión alta implica que necesitamos expandir la energía adicional para aplicar presión y empujar las moléculas a través de la columna de cromatografía (sí, la HPLC también tiene una columna). La HPLC se inventó más para la velocidad (y para el análisis rápido con una pequeña cantidad de sustancias). Por lo tanto, es más significativo hacer uso de HPLC para análisis y depender del CC normal para la producción de grandes volúmenes.

Answer 2

La cromatografía en columna líquida simplemente vino primero, por lo general era un lecho lleno de sílice amorfa a la que se agregaron solventes no polares seguidos por solventes cada vez más polares que dan un perfil de gradiente gradual.

En la cromatografía de columna abierta, la gravedad está reduciendo el solvente mientras que en HPLC usamos una bomba para empujar el solvente con hasta 20,000 psi de presión a través de la columna. El tamaño de las partículas empaquetadas en la columna es muy diferente, la columna abierta generalmente usa 40-60 micrones mientras que la HPLC usa 10 micrones, 5 micrones, 3 micrones y ahora hasta sub 2 micrones de partículas, lo que permite una separación mucho más rápida con una resolución mucho mayor para HPLC . Una separación por HPLC se realiza en unos pocos minutos, mientras que la columna abierta a menudo dura horas.
La HPLC siempre se puede usar, ya que ahora tenemos cromatógrafos para micro cantidades con las más altas sensibilidades, así como una máquina utilizada para separar los kilos de sustancias en una sola pasada. HPLC siempre tiene la ventaja de la velocidad, mientras que la columna abierta es barata.

Answer 3

Tamaño de partícula de la columna.

De acuerdo con la ecuación de Van Deemter, la separación de los componentes de la muestra es mejor cuanto más pequeñas sean las partículas de columna. Sin embargo, cuanto más pequeñas sean las partículas de la columna, mayor será la presión necesaria para atravesar la fase móvil en un espacio de tiempo razonable.

Hace 70 años, la tecnología no estaba allí para aprovechar al máximo esas variables en la ecuación de Van Deemter para mejorar la separación.