Si las rodajas de un cerebro se conservaran adecuadamente en frío lo antes posible, ¿veríamos neurotransmisores en vesículas bajo un microscopio?

Answer 1

Brevemente: los neurotransmisores no se ven bajo un microscopio de luz o fluorescente en cortes fisiológicos (agudos). Es posible localizar vesículas utilizando un microscopio electrónico o teñir contra proteínas y luego encontrarlas en un microscopio confocal. Con suerte, será posible rastrear los neurotransmisores en vivo en algún momento en el futuro.

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Las rebanadas fisiológicas no se utilizan para tal fin. Por cierto, se pueden obtener cortes fisiológicos, alias agudos, utilizando el método de “corte en caliente” (ver Temperatura fisiológica durante el corte del cerebro mejora la calidad de las preparaciones para cortes agudos), pero es un poco demasiado técnico. Por lo general, los cerebros se cortan para grabar: corrientes de un solo canal, eventos sinápticos, picos y potenciales de campo locales. Además, el etiquetado de las neuronas para los estudios de clasificación / colocalización de las neuronas se puede hacer en cortes agudos.

Por lo que sé, actualmente se realiza un gran esfuerzo para desarrollar una microscopía de súper resolución que permita observar la molécula de proteína única “en acción”; consulte, por ejemplo, esta revisión: Técnicas de imagen para evaluar la activación de linfocitos en acción. Sin embargo, a mi entender, estamos muy lejos de poder ver vesículas etiquetadas en cortes agudos, ni siquiera mencionar en vivo .

Para la tinción y la ME existen muchas otras técnicas, desde la fijación “simple” de PFA del cerebro seguida por los protocolos de tinción, hasta el método CLARITY y otras técnicas exigidas para las tinciones múltiples. Recomendaría observar detenidamente el trabajo del grupo Chris I. deZeeuw: trabajan en todos los niveles, desde la localización de vesículas usando EM hasta la electrofisiología in vitro e in vivo y el comportamiento. Vea por ejemplo (Admito que elegí este al azar y probablemente no sea la mejor opción, ya que no se trata de cerebelo): modulación de la plasticidad presináptica y aprendizaje por la señalización de quinasa regulada por señal H-ras / extracelular / sinapsina I

Answer 2

Sí. En general, esta técnica se denomina microscopía electrónica de fractura por congelación , útil para visualizar estructuras macro-macro moleculares, como vesículas en uniones neuro-musculares y en sinapsis.

Exocitosis de vesículas sinápticas capturada por congelación rápida y correlacionada con la liberación del transmisor cuántico.

Determinación de las distribuciones de tamaño de las vesículas mediante microscopía electrónica de congelación y fractura.

Comparación, por microscopía electrónica de fractura por congelación, de cromatóforos, vesículas de membrana derivadas de esferoplastos y células completas de Rhodopseudomonas s… – PubMed – NCBI

Answer 3

Si se realizó la preparación / tinción adecuada de portaobjetos / tisú, sí